1. 不同细胞的培养环境要求
细胞对培养环境的需求因细胞类型而异，不仅体现在培养基的不同，还包括生长空间密度的差异。
某些细胞在较高密度下更易生长，并表现出更好的状态，这类细胞通常生长速度较慢，如内皮细胞。而其他一些细胞在低密度下表现更佳，比如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。
特别是巨噬细胞，它们的生长和贴壁速度非常快，因此在传代时需要保留较少的细胞，以保持良好的状态。
巨噬细胞倾向于聚集生长，但在不同的细胞堆之间需要保留一定的空间。如果细胞过于密集，老化细胞的数量会增加，进而影响后续实验的结果。
因此，在培养细胞时，需要探索每种细胞的最佳生长密度。
2. 应对细胞形态不佳的策略
对于贴壁细胞，如果发现细胞形态欠佳或表面似有异物，可以在传代时尝试以下操作：
首先，倒掉旧的培养基，加入3毫升的新培养基（可带或不带血清）进行清洗，随后将其吸走。
接着，再加入3毫升培养基进行预吹打，轻轻沿着瓶底吹打一次，然后将其吸走。
这之后再进行正式的消化和吹打操作。巨噬细胞只需吹打，不需要消化。
接下来，将吹打下来的细胞悬液转移到预先加入培养基的新培养瓶中。
将培养瓶放入培养箱，并定期观察细胞贴壁情况，在10分钟、20分钟、30分钟分别检查一次。
当部分细胞贴壁后，迅速倒出培养基，加入3毫升新培养基，再轻轻清洗一次。
然后，加入完全培养基继续培养，观察细胞生长状态和形态。
这种方法被称为“二次传代”。
如果一次效果不理想，可以多次重复这一操作，直至找到细胞的最佳形态。需要根据细胞的生长习性选择合适的传代时机。对于喜欢高密度生长的细胞，可以等更多细胞贴壁后再传代，反之亦然。这种方法非常有效。
3. 培养基的用量
培养基的用量需要根据具体的细胞类型进行摸索，并非所有情况下都需要按照12毫升或14毫升的标准加培养基。有些细胞在少量培养基中反而表现更佳。对于生长迅速且易于培养的细胞，少量培养基通常会使细胞形态更好，但需要在换液时特别注意。
4. 培养基该怎样选？
经典或基础培养基通常为合成培养基，基于天然培养基成分，通过使用化学物质进行模拟合成，包含氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其他辅助成分。以下是一些常用培养基及其适用的细胞类型：
RPMI-1640：广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
吉诺生物-RPMI1640培养液
MEM：它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
吉诺生物-MEM培养液
DMEM-高糖：是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养，更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
吉诺生物-DMEM高糖培养液
DMEM-低糖：是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
吉诺生物-DMEM低糖培养液
DMEM/F12（1:1）：DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1:1结合，称为DMEM/F12培养基，作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1:1）中加入15mM HEPES缓冲液。
吉诺生物-DMEM/F12（1:1）培养液
α-MEM：一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
吉诺生物-α-MEM培养液
McCoy’s 5A：主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。
吉诺生物-McCoy’s 5A培养液
William’s Medium E：适合大鼠肝上皮细胞的长期培养。
吉诺生物-William’s Medium E培养液
以上为吉诺生物部分培养基产品，更多产品详情可关注“吉诺生物”公众号~
5. 培养瓶的选择
根据个人经验，生长速度较快的细胞在玻璃瓶中的生长状态往往优于一次性塑料瓶。同一种细胞在生长旺盛期，玻璃瓶中的生长状态也更为理想。
这可能是因为塑料瓶比玻璃瓶更容易贴壁，而生长速度快的细胞在塑料瓶这种较为安逸的环境中反而表现不如玻璃瓶。
因此，若想获得状态更佳的细胞，可以为生长速度较慢的细胞选择塑料瓶，而对于生长速度快的细胞或处于生长旺盛期的细胞，玻璃瓶可能更为适合。
6. 传代时的消化操作
传代时的消化过程对细胞的存活和状态至关重要。许多实验者发现，细胞在前几代生长良好，但经过几次传代后，细胞状态开始下降。
这通常是由于消化过程中对细胞造成了较大损伤。每次消化时，所有细胞都受胰酶作用，但每个细胞的生长状态和贴壁情况不同，因此同样的消化时间对所有细胞是不公平的。
为了解决这个问题，可以尝试“四步消化法”：
不加胰酶，倒掉旧培养基，加入少量新培养基清洗1-2遍，以去除漂浮的死细胞等杂质，为消化做准备。
加入少量新培养基吹打，将贴壁不牢固的细胞吹打下来，再用培养基清洗一次，所得悬液可混合传代到新瓶中培养，并与后续消化的细胞对比观察。
清除瓶内剩余液体后，加入少量胰酶润洗一遍，然后再加入少量胰酶进行消化，同时在显微镜下观察。
当细胞间出现明显间隙时，吸掉胰酶，加入新培养基吹打，再传代到新瓶中培养。此步骤可根据实际情况进行多次。
对于特别难消化的细胞，可分批次多次消化，以避免胰酶对细胞的过度损伤，保证细胞的最佳状态。
对于易消化的细胞，可能只需简单操作即可，但对于难消化的细胞，需特别注意消化过程的细节。
7. 换液、传代与清洗的注意事项
对于使用DMEM培养基的细胞，如果在换液时使用无血清1640进行清洗，后续培养效果通常优于直接用DMEM清洗的效果。同样地，用1640培养的细胞也有类似的表现。
如果不介意麻烦，可以选择PBS进行清洗，效果与无血清培养基相当，有时甚至更佳。清洗的目的是去除培养瓶中残留的血清，防止其影响胰酶的消化效果，保证胰酶的最佳活性。
使用PBS清洗后，可以尝试将细胞静置10-15分钟，等待细胞逐渐分离，然后再进行吹打。这种方法适用于某些细胞难以消化或胰酶不足的情况下，但需先测试是否适合你的细胞。
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|
| GNM31800-5 | RPMI1640培养液 | 500ml |
| GNM41500-5 | MEM培养液 | 500ml |
| GNM12800-5 | DMEM高糖培养液 | 500ml |
| GNM31600-5 | DMEM低糖培养液 | 500ml |
| GNM12500-5 | DMEM/F12培养液(1:1) | 500ml |
| GNM11900-5 | α-MEM培养液 | 500ml |
| GNM16600-5 | McCoy's 5A培养液 | 500ml |
| GNM41250-5 | William's Medium E | 500ml |
| GNM15050-1 | 0.25%胰酶 含酚红 | 100ml |
| GNM10010-5 | PBS缓冲液 PH7.4 | 500ml |