以下文章来源于爱吃洋芋的酸菜鱼 ，作者爱吃洋芋的酸菜鱼
一、定义及原理
纸片扩散法（又称K-B法）是一种常用的微生物药敏试验方法，主要用于检测微生物对抗生素的敏感度。其基本原理是将浸有抗菌药物的纸片贴在涂有致病菌的琼脂平板上，药物在琼脂中扩散，形成浓度梯度，从而在纸片周围形成抑菌圈。抑菌圈的大小反映了细菌对药物的敏感程度，抑菌圈越大，表示细菌对该药物的敏感度越高。
二、试验步骤
1.待测菌株接种物制备：从过夜孵育的平板上挑取菌落，制成菌悬液，调整浊度至0.5麦氏单位（MCF）（相当于1.5×10^8cfu/m）。
2.接种平板：用无菌棉签蘸取菌悬液，均匀涂布在琼脂平板表面，涂布三次，每次旋转平板60度，确保菌液覆盖整个琼脂表面。
3.放置测试药敏纸片：将抗菌药物纸片贴于已接种细菌的琼脂表面，纸片需分布均匀（用镊子轻压使其贴平），两纸片之间圆心距离不少于24mm，纸片边缘距离琼脂平板边缘不少于15mm。
4.孵育：将平板置于35℃孵育16-18小时（某些菌需特殊孵育条件，如流感嗜血杆菌需要放在含5%左右二氧化碳的孵箱中以促进其生长）。
5.抑菌圈直径测量：孵育后，将平板置于黑色背景上或易于观察的环境下，用游标卡尺测量抑菌圈的直径。
6.结果判读:根据抑菌圈的直径数值，参照相关标准（如CLSI文件），将测试结果报告为敏感(S)、中介(I)、耐药(R)或剂量依赖性敏感(SDD)等。
三、注意事项
1.接种菌液浓度需准确，涂布均匀。
2.纸片需与琼脂表面充分接触，且一旦放置不能再移动。
3.应使用标准化的培养基和药敏纸片，并进行质量控制。
4.对于特殊菌种或药物，需遵循特定的试验条件和判读标准。
注：图片为酸菜鱼拍摄。内容综合教材和网络资源整理，仅供学习交流。