流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单克隆分选,对复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等。
实验步骤:
1. 用T25培养瓶培养各细胞株,代细胞生长达到80-90%融合后,弃掉旧培养液
2. 用2ml的PBS洗细胞两次后,加入胰酶消化细胞,显微镜下观察细胞变圆即可,加入4ml的完全培养液终止消化
3. 用移液器轻轻吹下细胞,将细胞混合液移入15ml离心管中,1000r/m离心10min,离心结束后,弃掉培养液上清,用 5mlPBS 悬浮细胞沉淀,1000r/m离心10min
4. 弃上清后用500ul PBS悬浮细胞沉淀。之后分别加入抗体,4℃条件下孵育30min用流式分选细胞仪进行流式分析
结果案例: