在免疫治疗大热的今天，自然杀伤细胞（Natural Killer Cells，简称NK细胞）成为细胞治疗圈里的新宠。为什么？因为它们能“不用等指令”，就能直接发现并杀死肿瘤细胞和病毒感染细胞，效率高！但想让这些细胞在实验室里既活跃又有超强“战斗力”，其实没那么简单。
很多刚入门的同学会发现：“NK细胞怎么这么难‘养’？”别急！本文结合最新文献和业内实操经验，手把手带你从基础到进阶，教你如何科学、高效地“养出”高活性NK细胞。
和通常贴在培养瓶底的贴壁细胞不一样，NK细胞是“漂”在培养液里的悬浮细胞，对环境特别敏感：
极度依赖“营养”——细胞因子（像IL-2、IL-15、IL-21，缺一不可）；
本身体质多样，不同供体的细胞数量和状态有很大差异；
需要不断的外来“激励信号”，缺了刺激活性就会大大下降；
容易“过劳”或“衰老”，扩增太猛反而可能减分；
对污染极其敏感，一点点细菌或支原体污染，整批细胞全“报废”。
所以，养NK细胞关键不是让它多，而是让它强，让它时刻保持“打怪”能力！
1. 起点要好——细胞纯度要把控
尽量用新鲜的外周血样本或可靠的人外周血单个核细胞（PBMC）；
细胞分离时要用低速离心，移液要轻柔，别弄坏了珍贵的NK细胞；
用“CD56+磁珠分选”可以提高NK纯度，但次数别太多，否则会影响细胞状态。
科普小贴士：纯度不一定越高越好，但太低扩增时争抢资源，后期效率差！
2. 培养基不是越贵越好，合适才最重要
常见配方有：
普通RPMI-1640 配10%人源血清+IL-2/IL-15
临床专用的无血清免疫细胞培养基
要点提醒：
推荐用AB型人血清或专业配套的营养补充剂，保证批次稳定；
培养基一定要过滤，远离支原体污染；
细胞因子（比如IL-2）最好新鲜加，每冻融一次效力大概会打八折。
3. 哪种“营养包”最能激活NK？（细胞因子玩转法）
常见的因子各有特点：
最新研究常见组合是：
以IL-15为主，间隔几天加一次IL-21，比如IL-15每天5~10ng/mL持续加，IL-21每3~4天“短时冲击”一次（5~10ng/mL，12~24小时），这样能让NK细胞杀伤力更强。
4. 要不要加“饲养细胞”（Feeder）？扩增和安全要两手抓
不用Feeder：操作最简单、安全，扩增倍数一般在10~100倍；
用Feeder细胞（比如K562-mbIL21-4-1BBL细胞系）：扩增速度飞快，能达1000倍以上，活性也高，但要用辐照或灭活的Feeder，确保安全无污染。
实用建议：如果只是做基础实验，前期可以不用Feeder。如果要追求极高活性和超大规模扩增，K562-mbIL21-4-1BBL体系是业内公认的王者方案。
5.培养节奏把控好，“劳逸结合”最健康
细胞密度建议1-2 E6/mL；
密度太高会“饿死”自己，也容易废物堆积；
每2~3天加新鲜细胞因子，保持“营养”充足；
IL-2别一直高浓度，容易让NK“疲劳”，杀伤力会变差，比如NKG2D表现下调。
03 进阶秘籍：如何让NK细胞“更强”？
1. 点亮“记忆力”：CIML-NK细胞培养法
给NK细胞短时间“打一下鸡血”（比如IL-12+IL-15+IL-18刺激12~18小时），能让它们学会“记住目标”，杀伤力大增，分泌干扰素（IFN-γ）也更强，很适合肿瘤免疫实验。
2. 补充“能量包”，别让NK累坏了
NK细胞开足马力时，糖酵解和能量代谢需求量大：
加点丙酮酸、谷氨酰胺能让它更有活力；
适当加抗氧化成分，帮细胞清除多余“垃圾”，减少损伤；
注意培养液乳酸别太高，乳酸过多直接影响杀伤力！
3. 营造“真实环境”，避免体外强、体内弱
低氧环境（3~5%氧），有助于NK适应性与迁移能力提升；
用肿瘤细胞分泌的“上清液”给NK适度“加压”，模拟体内压力；
多用抗体依赖细胞毒性（ADCC）实验，检验杀伤力是否“够强”。
04 出错速查表：“我的NK细胞怎么不听话？”
05 一句话总结“养好NK细胞”的秘籍
起点要优：细胞质量最关键；
基础打牢：培养基和因子搭配合理；
扩增策略：Feeder与因子联用效率高；
密度、激活要把控：别让细胞累着或者“饿”着；
玩转进阶招数：激发记忆、调节能量、模拟真实环境。
养好NK细胞，既是一门科学，也是一门“手艺活”。没有绝对万能的“秘方”，但理解机制、依据文献和经验总结的方法，一定能助你把NK细胞养得既健康又有超强“战斗力”！
NK无血清扩增试剂盒
产品数据
效能无显著性差异，细胞杀伤性优于进口竞品
具有优异的细胞扩增效能
保持细胞优异的杀伤效能