在免疫细胞疗法家族中，CIK细胞（Cytokine-Induced Killer cells，细胞因子诱导的杀伤细胞）是一支特点鲜明的“混合部队”。它们的主力是一群CD3+CD56+的‘特种兵’，这意味着它们既保留了T细胞的某些特征，又获得了NK细胞的部分能力。其杀伤机制多样化，能够通过多种途径识别并攻击肿瘤细胞，展现出广谱的杀伤活性，在肿瘤免疫治疗中备受关注。
你是不是也想在实验室里把CIK细胞养得又多又强？不用怕，这篇“零基础到高手”实用攻略，专为你打造！CIK细胞本质上是将人外周血中的单个核细胞（PBMC）在体外用多种细胞因子共同培养后，诱导出的一群以CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质性细胞群体。它们之所以有用，正是因为其广谱的抗肿瘤活性和不严格的MHC限制性，可用于多种肿瘤的辅助治疗研究，培养流程也相对成熟稳定。02 入门五步法：CIK细胞培养这样做，起点就对了！- 分离时慢慢来，低速离心、轻柔移液，保持细胞高活力；
- 起始PBMC的质量是关键。虽然CIK细胞是体外诱导产生的，无需对NK或T细胞亚群进行精细分选，但对PBMC进行简单的去杂步骤（如差速贴壁去除部分单核细胞），可以减少杂质细胞的干扰，往往能获得更纯、状态更好的CIK细胞群体。
2. 培养基与试剂选择，适合的才是最好的
- 血清要求“无菌、批间差小”，或直接使用成分明确的无血清培养补充剂；
- 加0.22um滤膜过滤，避免任何细菌或支原体污染。
3. 诱导激活步骤是核心，谁“训练”得好谁战力强
CIK细胞的养成秘籍在于经典的“细胞因子序贯激活法”：- 第1天：加入IFN-γ(1000 U/mL)，预先激活免疫通路，提升细胞对后续刺激的敏感性。
- 第2天：加入抗CD3抗体 (如OKT3, 50-100 ng/mL)（可通过包被培养板或使用可溶性抗体），提供T细胞激活的关键信号。并同步加入：IL-2 (500-1000 IU/mL)：此为驱动CIK细胞扩增的核心因子。
【增强方案】IL-15 (50-100 ng/mL)：为获得更高数量与质量的CIK细胞，强烈建议从早期开始联合使用IL-15，它能有效促进细胞存活并增强杀伤功能，与IL-2具有协同作用。- 后续培养：每2-3天补充新鲜的培养基和IL-2 (及IL-15)，维持因子有效浓度。
小知识：CIK激活时接种浓度不宜过低（建议1-2 E6/mL），保证细胞间有足够的信号交流，才能被“猛一把”激活。
4. 培养密度与换液频率，精细管理出好细胞
- 每2~3天观察细胞密度，当密度超过2~2.5×10⁶/mL时及时传代，避免过度拥挤。
5. 收获时机与质量判断，恰到好处方为佳
- 过度培养（如超过18天）会导致细胞增殖停滞、凋亡增加，杀伤力反而下降。
- 收获时，应通过流式细胞术检测CD3+CD56+细胞的比例。一个成功的培养，此比例通常不低于30%，优质培养可达50%以上。同时，细胞活率（台盼蓝拒染法）应高于90%。
03 进阶秘籍：如何让CIK细胞“更高能、更持久”？- 在IL-2/IL-15基础上，可在培养中后期（如第5-7天）引入IL-21 (10-50 ng/mL)，有助于进一步提升CIK细胞的细胞毒作用。
- IL-7可用于支持T细胞的存活和增殖，可能在早期加入以提升整体扩增效率。
2. 巧用“代谢调控”，提升细胞能量
- 确保使用高质量的培养基，其已为细胞代谢优化了成分（如葡萄糖、谷氨酰胺）。
- 控制培养环境中的乳酸累积对于维持细胞功能至关重要。及时传代、避免密度过高是有效手段。
- 中途可清理部分死亡细胞（如通过Ficoll密度梯度离心），减少废物堆积。
3. 模拟“真环境”，提前适应体内挑战
- 为提升CIK细胞对特定肿瘤的识别能力，可在培养过程中使用肿瘤细胞裂解物或特定肿瘤抗原肽段进行刺激，使其‘熟悉敌情’。
- 使用标准的细胞毒性实验（如LDH释放法），以K562等NK敏感靶细胞作为对象，来准确评估CIK细胞的广谱杀伤活性，这是检验培养成果的“金标准”。
04 出错速查表：“我的CIK细胞怎么不听话？”
- 起点要新鲜：优质PBMC是成功的基础，适当去杂有益无害。
- 激活要精准：IFN-γ启动 → 抗CD3抗体+IL-2/IL-15驱动，是经典高效的诱导路径。
- 补液要勤快：维持最佳细胞密度，保证因子浓度，细胞才能“吃饱喝足”快速长。
- 收获要及时：抓住CD3+CD56+比例峰值（培养7-14天），过度培养等于白忙活！
- 检测要全面：流式看表型，杀瘤实验看功能，数据说话最可靠。
CIK细胞培养，既有标准流程，也有优化空间。关注这些细节，你不仅能顺利扩展出“量多、杀伤强、状态好”的CIK细胞队伍，还能为下游实验和临床应用打下坚实基础。
CIK细胞培养液-CIK细胞活化扩增-(day16)-对标竞品效能无显著性差异
