好久没学习新知识了，刚好最近在研究T细胞无血清培养基的事情，想着就顺便把T细胞能量代谢检测也看看吧！虽然目前接到的客户项目都只是对T细胞进行简单的OCR、ECAR检测，但将来必然还是会升级到这一步的。作为技术支持先学好，等再有咨询了，我来主动推荐给大家。
T细胞持久性（T cell persistence）是指回输或激活的T细胞在体内长期存活、扩增并维持抗病活性的能力。它是决定过继性细胞疗法（如CAR-T）及肿瘤免疫治疗成功与否的关键指标，直接关系到能否实现长期的疾病缓解和防止复发。在体外扩增过程中获得高代谢活性效应表型的 CAR-T 细胞在体内表现出较差的持久性和抗肿瘤活性。然而，在体外扩增过程中表现出低到中等代谢活性（这个具体范围多少算是中等，有空我再仔细瞅瞅）和高备用呼吸能力的 CAR-T 细胞则具有良好的抗肿瘤免疫功能，表现为更强的增值能力、更高的肿瘤细胞杀伤速率及细胞因子产生速率[1]。因此，对T细胞做这样的筛查鉴定筛选出更合适的T细胞用于治疗，可以获得更好的疗效。那Seahorse常规检测是否可以呢？我个人觉得，如果是在基础研究阶段，常规的OCR、ECAR检测应该问题不大，如果是想要得到更好的临床应用效果，还是建议按安捷伦官方推荐的方案来。
▲解偶联剂FCCP和BAM15对最大呼吸作用的比较
首先，解偶联剂安捷伦推荐了效果更好的BAM15，替换掉常用的FCCP。由下图可见，BAM15获得了更大的（即更精准的）最大呼吸值，这样也就得到了更精准的备用呼吸能力（Spare Respiration Capacity,SRC）。
▲Seahorse T细胞持久性检测的典型检测图和数据输出结果
用安捷伦官方试剂盒检测T细胞持久性和适应性得到的典型的检测图和数据输出结果，本质上好像就是换了个解偶联剂测线粒体压力，再加上ATP速率（测糖酵解ATP与氧化磷酸化ATP比）的检测。
安捷伦 Seahorse XF T 细胞适应性检测旨在用于评估在营养条件发生改变或存在限制的情况下， T 细胞是否能够满足代谢需求。通过这种方式可评估 T 细胞在肿瘤微环境中维持代谢适应性的能 力。通过以下方法可以创造营养受限的条件：使用底物通路抑制剂 （如 Etomoxir、 UK5099、 BPTES）、用其他碳源替代葡萄糖或直接改变检测液中代谢底物的含量水平。这项检测可报告线粒体呼吸和糖酵解 （代谢平衡）的基础 ATP 生成速率以及最大呼吸能力。典型的检测图和数据输出结果如下图。
▲SeahorseT 细胞适应性检测的典型检测图和数据输出结果（BTW，安捷伦官方的动力学图也是挺丑的，估计细胞特征就是这样的，大家做出来的图如果也丑，就不要太较真了哈！）
好了，我今天学习任务完成了，有需要做T细胞Seahorse细胞能量代谢分析的朋友及时联系我（19901610324，同微信），我及时让我们技术人员摸一下实验条件，然后就可以开干了！
参考文献
1. Rostamian et al. Cancer Letters 2021, 500, 107–118. 10.1016/j.canlet.2020.12.004.
参考资料：
1. 安捷伦官方资料（利用实时细胞能量代谢分析评估 T 细胞的生物能量代谢平衡和备用 呼吸能力）：https://www.agilent.com/cs/library/applications/an-xf-tcell-metabolic-profiling-kit-5994-4494zh-cn-agilent.pdf
2. 安捷伦官方资料（Seahorse XF T 细胞代谢分析试剂盒）：https://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/public/ug-xf-t-cell-metabolic-profiling-kit-5994-3493zh-cn-agilent.pdf